Javascript saiki dipateni ing browser sampeyan.Nalika javascript dipateni, sawetara fungsi situs web iki ora bakal bisa digunakake.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Departemen Ilmu Philippe Deprez, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Spanyol * Penulis iki duwe sawetara wawasan babagan karya iki Equal latar mburi kontribusi: Asam hialuronat (HA) minangka polisakarida alami sing digunakake ing produksi pengisi dermal kanggo tujuan estetis.Wiwit umur setengah umur sawetara dina ing jaringan manungsa, pangisi dermal berbasis HA diowahi kanthi kimia kanggo ndawakake umure ing awak.Modifikasi sing paling umum ing pangisi berbasis HA komersial yaiku nggunakake 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) minangka agen penghubung silang kanggo ngubungake rantai HA.BDDE residual utawa unreacted dianggep ora beracun ing <2 bagean saben yuta (ppm);mulane, BDDE residual ing pangisi dermal pungkasan kudu diukur kanggo njamin safety pasien.Materi lan metode: Panliten iki njlèntrèhaké deteksi lan karakterisasi prodhuk sampingan saka reaksi ikatan silang antara BDDE lan HA ing kondisi alkalin kanthi nggabungake kromatografi cair lan spektrometri massa (LC-MS).Asil: Sawise analisa sing beda-beda, ditemokake yen kondisi alkalin lan suhu dhuwur sing digunakake kanggo disinfect hidrogel HA-BDDE ningkatake pembentukan produk sampingan anyar iki, senyawa "kaya propilen glikol".Analisis LC-MS dikonfirmasi manawa prodhuk sampingan nduweni massa monoisotopik sing padha karo BDDE, wektu retensi (tR) sing beda, lan mode absorbansi UV sing beda (λ=200 nm).Ora kaya BDDE, diamati ing analisis LC-MS yen ing kondisi pangukuran sing padha, produk sampingan iki nduweni tingkat deteksi sing luwih dhuwur ing 200 nm.Kesimpulan: Asil kasebut nuduhake yen ora ana epoksida ing struktur senyawa anyar iki.Diskusi mbukak kanggo netepake risiko produk sampingan anyar iki sing ditemokake ing produksi hidrogel HA-BDDE (pengisi dermal HA) kanggo tujuan komersial.Kata kunci: asam hialuronat, pengisi dermal HA, asam hyaluronat cross-linked, BDDE, analisis LC-MS, produk sampingan BDDE.
Pengisi adhedhasar asam hialuronat (HA) minangka pangisi dermal sing paling umum lan populer digunakake kanggo tujuan kosmetik.1 Pengisi dermal iki minangka hidrogel, biasane kasusun saka> 95% banyu lan 0,5-3% HA, sing menehi struktur kaya gel.2 HA minangka polisakarida lan komponèn utama matriks ekstraselular vertebrata.Salah sawijining bahan.Iku kasusun saka (1,4) -asam glukuronat-β (1,3) -N-asetilglukosamin (GlcNAc) mbaleni unit disakarida sing disambungake dening ikatan glikosida.Pola disakarida iki padha ing kabeh organisme.Dibandhingake karo sawetara pangisi adhedhasar protein (kayata kolagen), sifat iki ndadekake HA molekul biokompatibel banget.Pangisi kasebut bisa nuduhake kekhususan urutan asam amino sing bisa dingerteni dening sistem kekebalan pasien.
Nalika digunakake minangka pengisi dermal, watesan utama HA yaiku turnover kanthi cepet ing jaringan amarga anane enzim khusus sing diarani hyaluronidase.Nganti saiki, sawetara modifikasi kimia ing struktur HA wis diterangake kanggo nambah setengah umur HA ing jaringan.3 Umume modifikasi iki nyoba nyuda akses hyaluronidase menyang polimer polisakarida kanthi ngubungake rantai HA.Mulane, amarga pembentukan jembatan lan ikatan kovalen intermolekul antarane struktur HA lan agen penghubung silang, hidrogel HA sing disambung silang ngasilake produk degradasi anti-enzim luwih akeh tinimbang HA alam.4-6
Nganti saiki, agen ikatan silang kimia sing digunakake kanggo ngasilake HA sing disambung silang kalebu metakrilamida, 7 hidrazida, 8 karbodiimida, 9 divinil sulfon, 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) lan poli(etilena glikol) diglycidyl eter.10 ,11 BDDE saiki minangka agen crosslinking sing paling umum digunakake.Sanajan jinis hidrogel iki wis kabukten aman sajrone pirang-pirang dekade, agen sambung silang sing digunakake yaiku reagen reaktif sing bisa dadi sitotoksik lan, ing sawetara kasus, mutagenik.12 Mulane, isi residual ing hidrogel pungkasan kudu dhuwur.BDDE dianggep aman nalika konsentrasi residual kurang saka 2 bagean saben yuta (ppm).4
Ana sawetara cara kanggo ndeteksi konsentrasi BDDE residu rendah, gelar cross-linking lan posisi substitusi ing hidrogel HA, kayata kromatografi gas, kromatografi eksklusi ukuran ditambah karo spektrometri massa (MS), metode pangukuran fluoresensi resonansi magnetik nuklir (NMR), lan Susunan dioda ditambah kromatografi cair kinerja dhuwur (HPLC).13-17 Panliten iki njlèntrèhaké deteksi lan karakterisasi prodhuk sampingan ing hidrogel HA sing disambung silang pungkasan sing diprodhuksi dening reaksi BDDE lan HA ing kahanan alkalin.HPLC lan kromatografi cair-spektrometri massa (analisis LC-MS).Amarga keracunan produk sampingan saka BDDE iki ora dingerteni, disaranake supaya kuantifikasi residu kasebut kudu ditemtokake kanthi cara sing padha karo metode sing biasane ditindakake ing BDDE ing produk pungkasan.
Garam natrium HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Jepang) sing dipikolehi nduweni bobot molekul ~1.368.000 Da (metode Laurent) 18 lan viskositas intrinsik 2,20 m3/kg.Kanggo reaksi crosslinking, BDDE (≥95%) dituku saka Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Saline buffered fosfat kanthi pH 7,4 dituku saka Sigma-Aldrich Company.Kabeh pelarut, asetonitril lan banyu sing digunakake ing analisis LC-MS dituku saka kualitas kelas HPLC.Asam format (98%) dituku minangka bahan reagen.
Kabeh eksperimen ditindakake ing sistem UPLC Acquity (Waters, Milford, MA, USA) lan disambungake menyang API 3000 triple quadrupole mass spectrometer dilengkapi sumber ionisasi electrospray (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Sintesis hidrogel HA sing disambung silang diwiwiti kanthi nambahake 198 mg BDDE menyang larutan natrium hyaluronate (NaHA) 10% (w / b) ing ngarsane alkali 1% (natrium hidroksida, NaOH).Konsentrasi BDDE pungkasan ing campuran reaksi yaiku 9,9 mg/mL (0,049 mM).Banjur, campuran reaksi kasebut dicampur kanthi saksama lan dihomogenisasi lan diidini kanggo nerusake ing 45 ° C suwene 4 jam.19 pH reaksi dipertahankan ing ~12.
Sawisé iku, campuran reaksi dikumbah nganggo banyu, lan hidrogel HA-BDDE pungkasan disaring lan diencerake nganggo buffer PBS kanggo nggayuh konsentrasi HA 10 nganti 25 mg / mL, lan pH pungkasan 7,4.Kanggo sterilisasi hidrogel HA sing disambung silang, kabeh hidrogel kasebut diautoklaf (120 ° C suwene 20 menit).Hidrogel BDDE-HA sing wis diresiki disimpen ing suhu 4 ° C nganti analisis.
Kanggo nganalisis BDDE sing ana ing produk HA sing disambung silang, sampel 240 mg ditimbang lan dilebokake ing bolongan tengah (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; volume 0,5 mL) lan disentrifugasi ing 10.000 rpm ing suhu kamar 10 menit.Total 20 µL cairan pull-down diklumpukake lan dianalisis.
Kanggo nganalisa standar BDDE (Sigma-Aldrich Co) ing kahanan alkalin (1%, 0,1% lan 0,01% NaOH), yen kondisi ing ngisor iki ditemokake, sampel cair yaiku 1:10, 1:100, utawa nganti 1: 1.000.000 Yen perlu, gunakake banyu deionisasi MilliQ kanggo analisis.
Kanggo bahan wiwitan sing digunakake ing reaksi cross-linking (HA 2%, H2O, 1% NaOH, lan 0,049 mM BDDE), 1 mL saben sampel sing disiapake saka bahan kasebut dianalisis kanthi nggunakake kondisi analisis sing padha.
Kanggo nemtokake spesifisitas puncak sing katon ing peta ion, 10 µL larutan standar BDDE 100 ppb (Sigma-Aldrich Co) ditambahake ing sampel 20 µL.Ing kasus iki, konsentrasi pungkasan standar ing saben sampel yaiku 37 ppb.
Kaping pisanan, nyiyapake solusi stok BDDE kanthi konsentrasi 11.000 mg / L (11.000 ppm) kanthi ngencerake 10 μL BDDE standar (Sigma-Aldrich Co) kanthi banyu 990 μL MilliQ (densitas 1,1 g / mL).Gunakake solusi iki kanggo nyiyapake solusi BDDE 110 µg/L (110 ppb) minangka pengenceran standar penengah.Banjur, gunakake pengencer standar BDDE penengah (110 ppb) kanggo nyiapake kurva standar kanthi ngencerake pengencer penengah kaping pirang-pirang kanggo entuk konsentrasi sing dikarepake 75, 50, 25, 10, lan 1 ppb.Minangka ditampilake ing Figure 1, ditemokake yen kurva standar BDDE saka 1,1 nganti 110 ppb nduweni linearitas sing apik (R2> 0,99).Kurva standar diulang ing papat eksperimen independen.
Gambar 1 BDDE kurva kalibrasi standar dijupuk dening analisis LC-MS, kang korélasi apik diamati (R2> 0,99).
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;LC-MS, kromatografi cair lan spektrometri massa.
Kanggo ngenali lan ngitung standar BDDE sing ana ing HA sing disambung silang lan standar BDDE ing solusi basa, analisis LC-MS digunakake.
Pemisahan kromatografi digayuh ing kolom LUNA 2.5 µm C18(2)-HST (50×2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) lan disimpen ing suhu kamar (25°C) sajrone analisis.Fase gerak kasusun saka asetonitril (pelarut A) lan banyu (pelarut B) sing ngandhut asam format 0,1%.Fase seluler dielusi kanthi elusi gradien.Gradien kaya ing ngisor iki: 0 menit, 2% A;1 menit, 2% A;6 menit, 98% A;7 menit, 98% A;7,1 menit, 2% A;10 menit , 2% A. Wektu mlaku 10 menit lan volume injeksi 20 µL.Wektu retensi BDDE kira-kira 3,48 menit (saka 3,43 nganti 4,14 menit adhedhasar eksperimen).Fase seluler dipompa kanthi laju aliran 0,25 mL / min kanggo analisis LC-MS.
Kanggo analisis lan kuantifikasi BDDE dening MS, sistem UPLC (Waters) digabungake karo API 3000 triple quadrupole mass spectrometer (AB SCIEX) sing dilengkapi sumber ionisasi electrospray, lan analisis ditindakake ing mode ion positif (ESI +).
Miturut analisis fragmen ion sing ditindakake ing BDDE, fragmen kanthi intensitas paling dhuwur ditemtokake minangka fragmen sing cocog karo 129.1 Da (Gambar 6).Mulane, ing mode pemantauan multi-ion (MIM) kanggo kuantifikasi, konversi massa (rasio massa-kanggo-isi [m / z]) saka BDDE yaiku 203,3 / 129,1 Da.Uga nggunakake mode scan lengkap (FS) lan mode pindai ion produk (PIS) kanggo analisis LC-MS.
Kanggo verifikasi kekhususan metode kasebut, sampel kosong (fase seluler awal) dianalisis.Ora ana sinyal sing dideteksi ing sampel kosong kanthi konversi massa 203.3 / 129.1 Da.Babagan pengulangan eksperimen, 10 injeksi standar 55 ppb (ing tengah kurva kalibrasi) dianalisis, nyebabake simpangan standar residual (RSD) <5% (data ora ditampilake).
Isi BDDE residual diukur ing wolung hidrogel HA sing disambung silang BDDE autoklaf, cocog karo papat eksperimen independen.Kaya sing diterangake ing bagean "Bahan lan Metode", kuantifikasi dievaluasi kanthi nilai rata-rata kurva regresi saka pengenceran standar BDDE, sing cocog karo puncak unik sing dideteksi ing transisi massa BDDE 203.3 / 129.1 Da, kanthi retensi. wektu 3.43 kanggo 4.14 menit Ora ngenteni.Gambar 2 nuduhake conto kromatogram standar referensi 10 ppb BDDE.Tabel 1 ngringkes isi sisa BDDE saka wolung hidrogel sing beda.Rentang regane yaiku 1 nganti 2,46 ppb.Mulane, konsentrasi BDDE residual ing sampel bisa ditampa kanggo panggunaan manungsa (<2 ppm).
Gambar 2 Ion kromatogram 10 ppb BDDE standar referensi (Sigma-Aldrich Co), MS (m / z) transisi dijupuk dening analisis LC-MS 203,30 / 129,10 Da (ing mode MRM positif).
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;LC-MS, kromatografi cair lan spektrometri massa;MRM, ngawasi reaksi kaping pirang-pirang;MS, massa;m/z, rasio massa-kanggo-muatan.
Cathetan: Sampel 1-8 yaiku hidrogel HA sing disambung silang BDDE kanthi autoklaf.Jumlah sisa BDDE ing hidrogel lan puncak wektu retensi BDDE uga dilaporake.Pungkasan, ana puncak anyar kanthi wektu retensi sing beda uga dilaporake.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;HA, asam hialuronat;MRM, ngawasi reaksi kaping pirang-pirang;tR, wektu retensi;LC-MS, kromatografi cair lan spektrometri massa;RRT, wektu penylametan relatif.
Kaget, analisis kromatogram ion LC-MS nuduhake yen adhedhasar kabeh sampel hidrogel HA autoclaved cross-linked sing dianalisis, ana puncak ekstra ing wektu retensi sing luwih cendhek saka 2,73 nganti 3,29 menit.Contone, Gambar 3 nuduhake kromatogram ion saka sampel HA sing disambung silang, ing ngendi puncak tambahan katon ing wektu retensi sing beda kira-kira 2,71 menit.Wektu retensi relatif (RRT) sing diamati antarane puncak sing mentas diamati lan puncak saka BDDE ditemokake 0,79 (Tabel 1).Amarga kita ngerti manawa puncak sing mentas diamati kurang ditahan ing kolom C18 sing digunakake ing analisis LC-MS, puncak anyar bisa uga cocog karo senyawa sing luwih polar tinimbang BDDE.
Gambar 3 Kromatogram ion sampel hidrogel HA ikatan silang sing dipikolehi dening LC-MS (konversi massa MRM 203.3/129.0 Da).
Singkatan: HA, asam hialuronat;LC-MS, kromatografi cair lan spektrometri massa;MRM, ngawasi reaksi kaping pirang-pirang;RRT, wektu penylametan relatif;tR, wektu retensi.
Kanggo ngilangi kemungkinan puncak anyar sing diamati bisa dadi rereged sing asline ana ing bahan mentah sing digunakake, bahan mentah kasebut uga dianalisis nggunakake metode analisis LC-MS sing padha.Bahan wiwitan sing dianalisis kalebu banyu, 2% NaHA ing banyu, 1% NaOH ing banyu, lan BDDE kanthi konsentrasi sing padha digunakake ing reaksi silang.Kromatogram ion saka bahan wiwitan sing digunakake ora nuduhake senyawa utawa puncak, lan wektu retensi cocog karo puncak anyar sing diamati.Kasunyatan iki mbatalake ide manawa ora mung bahan wiwitan bisa ngemot senyawa utawa zat sing bisa ngganggu prosedur analisis, nanging ora ana tandha-tandha kemungkinan kontaminasi silang karo produk laboratorium liyane.Nilai konsentrasi sing dipikolehi sawise analisis LC-MS saka BDDE lan puncak anyar ditampilake ing Tabel 2 (sampel 1-4) lan kromatogram ion ing Gambar 4.
Cathetan: Sampel 1-4 cocog karo bahan mentah sing digunakake kanggo ngasilake hidrogel HA sing disambung silang BDDE kanthi autoklaf.Sampel kasebut ora diautoklaf.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;HA, asam hialuronat;LC-MS, kromatografi cair lan spektrometri massa;MRM, ngawasi reaksi kaping pirang-pirang.
Gambar 4 cocog karo kromatogram LC-MS saka sampel saka bahan mentah sing digunakake ing reaksi cross-linking HA lan BDDE.
Cathetan: Kabeh iki diukur ing konsentrasi lan rasio sing padha digunakake kanggo nindakake reaksi cross-linking.Angka kanggo bahan mentah sing dianalisis kanthi kromatogram cocog karo: (1) banyu, (2) larutan banyu 2% HA, (3) larutan banyu NaOH 1%.Analisis LC-MS ditindakake kanggo konversi massa 203.30 / 129.10 Da (ing mode MRM positif).
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;HA, asam hialuronat;LC-MS, kromatografi cair lan spektrometri massa;MRM, ngawasi reaksi kaping pirang-pirang.
Kondisi sing nyebabake pembentukan puncak anyar ditliti.Kanggo nyinaoni kepiye kahanan reaksi sing digunakake kanggo ngasilake hidrogel HA sing disambung silang mengaruhi reaktivitas agen penghubung silang BDDE, sing ndadékaké pembentukan puncak anyar (bisa uga produk sampingan), pangukuran sing beda-beda ditindakake.Ing tekad kasebut, kita sinau lan nganalisa crosslinker BDDE pungkasan, sing diolah kanthi konsentrasi NaOH sing beda (0%, 1%, 0.1%, lan 0.01%) ing medium banyu, disusul utawa tanpa autoklaf.Prosedur bakteri kanggo simulasi kahanan sing padha padha karo cara sing digunakake kanggo ngasilake hidrogel HA sing disambung silang.Kaya sing diterangake ing bagean "Bahan lan Metode", transisi massa sampel dianalisis dening LC-MS dadi 203.30 / 129.10 Da.BDDE lan konsentrasi puncak anyar diitung, lan asil ditampilake ing Tabel 3. Ora ana puncak anyar sing dideteksi ing conto sing ora diautoklaf, preduli saka anané NaOH ing larutan (sampel 1-4, Tabel. 3).Kanggo conto autoclaved, puncak anyar mung dideteksi ing ngarsane NaOH ing solusi, lan tatanan saka puncak katoné gumantung ing konsentrasi NaOH ing solusi (sampel 5-8, Tabel 3) (RRT = 0,79).Figure 5 nuduhake conto kromatogram ion, nuduhake loro conto autoclaved ing ngarsane utawa ora ana NAOH.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;LC-MS, kromatografi cair lan spektrometri massa;MRM, ngawasi reaksi kaping pirang-pirang.
Cathetan: Kromatogram ndhuwur: Sampel diolah nganggo larutan banyu NaOH 0,1% lan diautoklaf (120°C suwene 20 menit).Kromatogram ngisor: Sampel ora diolah nganggo NaOH, nanging diautoklaf ing kondisi sing padha.Konversi massa 203.30 / 129.10 Da (ing mode MRM positif) dianalisis dening LC-MS.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;LC-MS, kromatografi cair lan spektrometri massa;MRM, ngawasi reaksi kaping pirang-pirang.
Ing kabeh conto autoclaved, kanthi utawa tanpa NaOH, konsentrasi BDDE suda banget (nganti 16,6 kaping) (sampel 5-8, Tabel 2).Penurunan konsentrasi BDDE bisa uga amarga kasunyatane ing suhu dhuwur, banyu bisa dadi basa (nukleofil) kanggo mbukak cincin epoksida BDDE kanggo mbentuk senyawa 1,2-diol.Kualitas monoisotop senyawa iki beda karo BDDE lan mulane ora bakal kena pengaruh.LC-MS ndeteksi owah-owahan massa 203,30 / 129,10 Da.
Pungkasan, eksperimen kasebut nuduhake yen generasi puncak anyar gumantung marang anané BDDE, NAOH, lan proses autoklaf, nanging ora ana hubungane karo HA.
Puncak anyar sing ditemokake ing wektu retensi kira-kira 2,71 menit banjur ditondoi dening LC-MS.Kanggo tujuan iki, BDDE (9,9 mg / mL) diinkubasi ing larutan banyu NaOH 1% lan diautoklaf.Ing Tabel 4, karakteristik puncak anyar dibandhingake karo puncak referensi BDDE sing dikenal (wektu retensi kira-kira 3,47 menit).Adhedhasar analisis fragmentasi ion saka rong puncak kasebut, bisa disimpulake yen puncak kanthi wektu retensi 2,72 menit nuduhake pecahan sing padha karo puncak BDDE, nanging kanthi intensitas sing beda (Gambar 6).Kanggo puncak sing cocog karo wektu retensi (PIS) 2,72 menit, puncak sing luwih kuat diamati sawise fragmentasi kanthi massa 147 Da.Ing konsentrasi BDDE (9,9 mg / mL) sing digunakake ing penentuan iki, mode absorbansi sing beda (UV, λ = 200 nm) ing spektrum ultraviolet uga diamati sawise pamisahan kromatografi (Gambar 7).Puncak kanthi wektu retensi 2,71 menit isih katon ing 200 nm, dene puncak BDDE ora bisa diamati ing kromatogram ing kondisi sing padha.
Tabel 4 Asil karakterisasi puncak anyar kanthi wektu retensi udakara 2,71 menit lan puncak BDDE kanthi wektu retensi 3,47 menit.
Cathetan: Kanggo entuk asil kasebut, analisis LC-MS lan HPLC (MRM lan PIS) ditindakake ing rong puncak kasebut.Kanggo analisis HPLC, deteksi UV kanthi dawa gelombang 200 nm digunakake.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;HPLC, kromatografi cair kinerja dhuwur;LC-MS, kromatografi cair lan spektrometri massa;MRM, ngawasi reaksi kaping pirang-pirang;m/z, rasio massa-kanggo-isi;PIS, pemindaian Ion produk;sinar ultraviolet, sinar ultraviolet.
Cathetan: Fragmen massa dijupuk kanthi analisis LC-MS (PIS).Kromatogram ndhuwur: spektrum massa fragmen sampel standar BDDE.Kromatogram ngisor: Spektrum massa puncak anyar sing dideteksi (RRT sing ana gandhengane karo puncak BDDE yaiku 0,79).BDDE diproses ing larutan NaOH 1% lan diautoklaf.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl eter;LC-MS, kromatografi cair lan spektrometri massa;MRM, ngawasi reaksi kaping pirang-pirang;PIS, scan ion produk;RRT, wektu penylametan relatif.
Gambar 7 Kromatogram ion saka ion prekursor 203,30 Da, lan (A) puncak anyar kanthi wektu retensi 2,71 menit lan (B) deteksi UV saka puncak standar referensi BDDE ing menit 3,46 ing 200 nm.
Ing kabeh hidrogel HA sing disambung silang, diamati yen konsentrasi BDDE residual sawise kuantifikasi LC-MS <2 ppm, nanging ana puncak sing ora dingerteni muncul ing analisis.Puncak anyar iki ora cocog karo produk standar BDDE.Produk standar BDDE uga wis ngalami konversi kualitas sing padha (konversi MRM 203.30 / 129.10 Da) analisis ing mode MRM positif.Umumé, cara analitis liya kayata kromatografi digunakake minangka tes watesan kanggo ndeteksi BDDE ing hidrogel, nanging watesan deteksi maksimum (LOD) rada luwih murah tinimbang 2 ppm.Ing tangan liyane, nganti saiki, NMR lan MS wis digunakake kanggo ciri derajat salib-linking lan / utawa modifikasi HA ing pecahan unit gula produk HA cross-linking.Tujuan saka teknik kasebut ora tau kanggo ngitung deteksi sisa BDDE ing konsentrasi sing sithik kaya sing digambarake ing artikel iki (LOD metode LC-MS = 10 ppb).
Wektu kirim: Sep-01-2021